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Propagação de CAR (Cilia-Associated Respiratory) Bacillus em cultura de células e padronização da reação da polimerase em cadeia com transcrição reversa (RT-PCR)

CAR bacillus é uma bacteria extracelular, gram negativa, que está associada à doença respiratória em colônias convencionais de camundongos e ratos. O objetivo deste estudo foi realizar a padronização do RT-PCR a fim de detectar a infecção por CAR bacillus em colônias de ratos e camundongos. A cepa C...

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Bibliographic Details
Main Authors: Andrade, Lenira Aparecida Guaraldo de, Passos, Luiz Augusto Correa, Alves, Delma Pegolo, Gilioli, Rovilson, Demolin, Daniele Masselli Rodrigues, Martins, Sandra Soares
Format: Online
Language:Portuguese
Published: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) 2016
Subjects:
CAR bacillus. RT-PCR. RNA.
Online Access:https://econtents.sbu.unicamp.br/eventos/index.php/simtec/article/view/9121
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Description
Summary:CAR bacillus é uma bacteria extracelular, gram negativa, que está associada à doença respiratória em colônias convencionais de camundongos e ratos. O objetivo deste estudo foi realizar a padronização do RT-PCR a fim de detectar a infecção por CAR bacillus em colônias de ratos e camundongos. A cepa CB-M proveniente do CIEA (Japão) foi utilizada nos experimentos. Células murinas 3T3 fibroblastóides foram infectadas e quando do aparecimento de efeito citopático, congeladas. A bactéria foi visualizada através da coloração pela prata. Grupos de camundongos foram infectados através de inoculação intranasal e amostras de swabs oral, nasal, traquéia e pulmão foram coletadas nos dias 7,12,15,19,28 após a infecção. O RNA foi extraído usando TRIzol para posterior amplificação. Primers específicos foram testados sob diferentes concentrações. Os soros foram submetidos à imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos, através de células 3T3 infectadas. A presença da bactéria na suspensão celular foi confirmada através do RT-PCR e o produto amplificado de 133 pares de base observado. Resultados positivos no RTPCR dos pulmões foi obtido nos dias 15,19 e 28 pós infecção e anticorpos após 8 semanas.
ISSN:2525-5398

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